Darujte krv pre antinukleárny faktor. Reumatologické vyšetrenie

05.04.2020

Imunitný systém človeka je jedinečný dobre koordinovaný mechanizmus schopný reagovať na akékoľvek vonkajšie zavedenie patogénnych faktorov, čím chráni telo pred množstvom chorôb. Ale ako viete, z každého pravidla existujú výnimky a v tomto prípade vyzerajú ako reakcia imunitného systému na vlastné bunky, čo sa nazýva autoimunitné ochorenia.

Pri týchto patológiách sa vytvárajú protilátky, ktoré napádajú zdravé bunky, poškodzujú ich alebo ničia. V dôsledku toho dochádza k porušeniu fungovania jednotlivých tkanivových štruktúr a dokonca aj orgánov. Takéto patológie sa v dôsledku ich prevalencie a zapojenia do procesu niekoľkých orgánov alebo systémov nazývajú systémové ochorenia.

Kedy moderné metódy laboratórna diagnostika, jedným z nich je krvný test ANF na vyhľadávanie antinukleárneho faktora, ktorý vám umožňuje identifikovať antinukleárne (antinukleárne) protilátky a určiť príčinu patológie. Tento indikátor je jedným z markerov systémových ochorení. spojivové tkanivo(SCST), akceptovaný ako „zlatý štandard“ tohto typu výskumu.

Základné pojmy charakterizujúce WCTD

Ako už bolo opísané vyššie, patogenéza týchto patológií pochádza z funkčných porúch. imunitný systém a vývoj ochranných protilátok proti určitým zložkám ich vlastných buniek. Takéto bunky, vzhľadom na zvláštnosť ich pôvodu, majú druhé meno - autoprotilátky. V procese zlyhania imunity prichádzajú do kontaktu s jadrovými proteínovými zlúčeninami, nukleovými kyselinami a antigénmi cytoplazmy, čo vedie k objaveniu sa symptómov. zápalové ochorenia, ako napríklad:

štrukturálne zmeny v tkanivách a orgánoch;
výrazná neprimeraná únava;
bolesť vo svaloch a kĺboch;
poškodenie kože;
chudnutie a iné.

Antinukleárne protilátky (ANA) sa môžu tvoriť pri pomerne širokom spektre autoimunitných patológií, ale s najväčšou pravdepodobnosťou sa vyskytujú pri systémovom lupus erythematosus (SLE).

ANF by sa mal užívať, ak sa objavia známky predĺženia zápalový proces

Referencia! Podľa štatistík má viac ako 90 % pacientov trpiacich CTD abnormálnu produkciu takýchto protilátok. V súčasnosti je študovaných asi 200 ich druhov, ktoré dostali všeobecný názov - antinukleárny faktor. Sú zastúpené najmä imunoglobulínmi triedy G, ale niekedy sa vyskytujú aj M alebo A.

Podstata krvného testu na antinukleárny faktor

Predtým, ako sa ponoríme do špecifík vykonania štúdie o ANF, stojí za zmienku, že táto technika bola vynájdená a začala sa používať už dávno - v 60. rokoch minulého storočia. V diagnostickej praxi sa však rozšíril až na začiatku 80. rokov XX storočia po zlepšení. Ešte v roku 1961 použil vedec Beck ako substrát bunky laboratórnych zvierat a až v roku 1982 Tan použil súvislú ľudskú bunkovú líniu HEp-2 na hľadanie ANF.

Hoci hlavným účelom použitia tohto testu je stanovenie diagnózy lupus erythematosus, stále sa považuje za univerzálnu techniku pre iné kolagenózy (MCTS). Medzi posledné patria:

sklerodermia;
dermatomyozitída;
nodulárna periarteritída;
chronická aktívna hepatitída atď.

Jednou z najpohodlnejších, a teda aj najčastejšie používaných metód na stanovenie antinukleárneho faktora v krvi pacientov, je nepriama imunofluorescencia. Štúdia sa uskutočňuje aplikáciou krvného séra na bunky transplantovateľnej epiteloidnej línie adenokarcinómu ľudského hrtana HEp-2 (obsahujúceho určitý počet jadrových antigénov) s použitím značeného konjugátu (zlúčeniny) s protilátkami.

Táto voľba nebola urobená náhodou - bunky HEp-2 sú veľmi vhodným substrátom na štúdium biomateriálu. Majú pomerne veľké jadrá a keď sa vysadia na laboratórne podložné sklíčka, rastú v jednej vrstve. Ako substrát možno použiť aj iné ľudské bunkové línie, ale úspešná morfológia a kultivácia rozhodne robí z HEp-2 nepostrádateľný materiál.

V priebehu diagnostiky, keď sa pacientovo sérum inkubuje s bunkovým substrátom, v prítomnosti ANA sa tieto kombinujú s príslušnými jadrovými antigénmi. Väzbové miesta ANF s HEp-2 sa určujú pomocou konjugátu značeného fluoresceínom (farbivom). Na vyhodnotenie výsledkov reakcií, ktoré sa vyskytli, sa používa luminiscenčný mikroskop, ktorý umožňuje rozlíšiť povahu a stupeň výsledných väzov.

Fluorescenčný mikroskop pre laboratórny výskum ANF

Referencia! Ľudský HEp-2 má na rozdiel od tkanivových kryosekcií zvierat vyššiu rýchlosť bunkového delenia, čo umožňuje detegovať protilátky proti antigénom, ktoré sú exprimované len počas delenia. V ľudskom substráte tiež nie je žiadna bunková matrica, čo znižuje kvalitu vizualizácie študovanej luminiscencie.

Aké skupiny antigénov sa používajú v štúdii?

Pri dešifrovaní materiálov je vždy potrebné brať do úvahy, že spektrum ANA zahŕňa pomerne veľkú skupinu autoprotilátok proti nukleoproteínom, ribonukleoproteínom, histónom, DNA a iným. štruktúrne jednotky jadier. Z toho vyplýva, že funkčnosť testu je zameraná na detekciu protilátok proti zložkám jadra a cytoplazmy, ktoré boli pôvodne identifikované pri SLE.

Neskôr sa diagnostické možnosti štúdie rozšírili v dôsledku stanovenia takýchto protilátok v iných CTD. Pri skríningových metódach na detekciu celkovej ANA sa spravidla používa určitý súbor antigénov, ktoré sa považujú za hlavné markery autoimunitného CTD.

Patria sem protilátky triedy IgG:

SS-A (Ro) – jadrové ribonukleoproteíny;
SS-B (La) – jadrové proteíny;
Scl-70, proteín-enzým (topoizomeráza-1);
natívna dvojvláknová DNA;
RNP/Sm, komplex antigénov;
Jo-1, enzým RNA syntetáza;
CENP-B (Centromere)
bunky Hep-2;
mitochondrie (PDC).

AHA sú pre telo prakticky neškodné – nie sú schopné preniknúť do živých tkanív. Ale v niektorých prípadoch sa môžu spojiť do komplexov antigén-protilátka, čo vedie k štrukturálnej deštrukcii tkanív. Jedným z takýchto príkladov je poškodenie renálneho parenchýmu pri SLE. Keďže v procese CTD je zapojených niekoľko orgánov, detekcia ANA nemá pre diagnózu prvoradý význam, ale považuje sa len za potvrdenie určitých symptómov.

Schopnosti analýzy ANF, vyjadrené v percentách

Štúdium výsledkov

Po vykonaní všetkých potrebných postupov – odberu biomateriálu a jeho laboratórnej príprave na štúdiu sa výsledky vyhodnotia a interpretujú. To zahŕňa stanovenie titra (koncentrácie) protilátok a typu luminiscencie. Významným parametrom pre diagnostiku je koncentračný index nad 1:160. Napríklad pri exacerbácii reumatizmu môže prekročiť 1:640, zatiaľ čo v období remisie dochádza k poklesu na 1:160–1:320.

Typ žiary ukazuje ciele ANA, čo je obzvlášť dôležitý klinický bod, ktorý riadi následné kroky lekára pri predpisovaní diagnostických opatrení. Podľa povahy žiary jadier pri použití HEp-2 sa určí viac ako 20 variantov farbenia jadier v závislosti od typov protilátok prítomných v biomateriáli. Medzi hlavné patria nasledujúce typy žiaroviek.

Periférne. Žiarenie indikuje prítomnosť anti-DNA protilátok, čo potvrdzuje SLE. Hlavnými typmi antigénov pre periférny typ sú histónové proteíny a DNA.
Difúzne (homogénne). Takáto žiara sa pozoruje pri SLE, sprevádzaná poškodením štruktúry obličiek a podobnými CTD, nefritídou, sklerodermiou, ako aj liekmi vyvolanými SLE. Antigény tohto typu sú reprezentované dsDNA, histonáty a nukleozómy.
Nukleárny (jadrový). Tento typ je charakteristický pre systémovú formu sklerodermie a určuje sa v prítomnosti protilátok u pacientov - RNA polymeráza 1, PM/Scl, NOR, U3RNP.
Cytoplazmatický. Tento typ osvetlenia indikuje prítomnosť ANA až tRNA syntetáz, menovite Jo-1, a pozoruje sa pri polymyozitíde.
Granulovaný. Určené pri Sjögrenovom syndróme, infekčná mononukleóza zmiešané CTD (Sharpov syndróm, MCTD) a liekmi indukovaný lupusový syndróm. Prevažne prítomné antigény pre tento typ sú SS-A, SS-B, Sm, U1-RNP a PCNA.
Veľké zrnité. Je charakteristická pre zmiešané CTD a podľa mnohých vedcov je spojená s prítomnosťou antigénu RNP.
Jemne zrnitý. Zisťuje sa prítomnosť protilátok vytvorených proti ribonukleovým proteínom – ASSP (ACCP), SS-A, SS-B a iné. Takéto protilátky sú charakteristické pre SLE, ako aj pre jeho špecifické kožné formy, reumatoidnú artritídu, sklerodermiu, polymyozitídu, Sjögrenov syndróm.
Centromeric. Tento typ sa pozoruje hlavne pri sklerodermii. Hoci v jednej vzorke krvi, najmä u jedincov s difúznym CTD, možno v oddelenej plazme detegovať protilátky proti rôznym jadrovým zložkám.
Bodové inklúzie v jadre. Tento typ sa deteguje prevažne pri autoimunitných ochoreniach pečene. S ním možno kombinovať niekoľko fluorescenčných typov, napríklad nukleárny a jemne granulovaný, čo je spôsobené protilátkami proti Scl-70.

Referencia! Zistilo sa, že so zvýšením riedenia plazmatického biomateriálu sa môžu meniť parametre luminiscencie, pretože mnohé protilátky sú charakterizované zmenou aktivity pri rôznych stupňoch koncentrácie.

Faktory, ktoré môžu skresliť výsledky

Spoľahlivosť údajov získaných počas štúdie môže byť ovplyvnená len niekoľkými faktormi, ktoré môžu ukázať ako falošne pozitívny, tak aj falošne negatívny výsledok. Nepravdepodobné reakcie posunu nahor sa teda pozorujú u starších pacientov nad 60 rokov (podľa štatistík v 10–37 % prípadov) a pri užívaní liekov, ktoré spôsobujú drogový lupus (niektoré antibiotiká, antikoncepcia, sulfónamidy, tiazidové diuretiká).

Zistilo sa, že 5–55 % žien s Prsné implantáty, zvyšuje koncentráciu AHA. Nesprávna diagnóza s posunom nadol môže byť spôsobená použitím glukokortikoidných liekov - Prednizolón, Metipred alebo Dexametazón.

Patrí do skupiny veľkých kolagenóz, pre ktoré je charakteristické difúzne poškodenie spojivového tkaniva a ciev. Včasná diagnóza Táto patológia je vážnym problémom, pretože SLE môže začať pod „maskou“ iných chorôb. Keďže SLE je autoimunitné ochorenie, jeho mechanizmus klinické prejavy, podľa moderných konceptov sa vysvetľuje z nasledujúcich pozícií:

cirkulujúce imunitné komplexy (CIC), ktoré zahŕňajú antinukleárne protilátky, ktoré sa ukladajú v mikrocirkulačnej väzbe, vedú k rozvoju vaskulopatie a poškodeniu tkaniva;
autoprotilátky proti krvným bunkám vedú k leuko-, lymfotrombopénii a anémii;
antifosfolipidové protilátky vedú k rozvoju antifosfolipidového syndrómu (APS).

Moderné metódy imunologickej laboratórnej diagnostiky umožňujú identifikovať všetky zložky patogenézy SLE a tým verifikovať diagnózu ochorenia s mimoriadnou, takmer 100% presnosťou. Prítomnosť akýchkoľvek zmien v analýzach zároveň umožňuje ich interpretáciu len s prihliadnutím na individuálny klinický obraz.

Treba poznamenať, že stará metóda diagnostiky SLE podľa prítomnosti LE buniek v krvi neobstála v skúške času, vykazovala extrémne nízku citlivosť a špecificitu, a preto sa od nej upustilo. LE bunky dokonca nie sú zahrnuté v kritériách SLE.

Hlavné znaky SLE sú:

Indikácie pre vymenovanie krvného testu na markery systémového lupus erythematosus

kožný lupus;
liečivý lupus;
trombocytopenická purpura;
erytrodermiu;
závažné poškodenie pečene;
syndróm CREST;
polymyozitída;
dermatomyozitída;
chronická juvenilná artritída;
autoimunitná hepatitída;
sklerotizujúca cholangitída;
polyneuropatia;
myelitída;

Aký je postup?

Odber krvi sa vykonáva z kubitálnej žily ráno nalačno.

Príprava na analýzu

Lupus antikoagulant

Lupus antikoagulant (LA) je jedným z dôležitých skríningových a potvrdzujúcich testov na diagnostiku APS. VA vznikajú v organizme v dôsledku rozvoja autoimunitných procesov po infekčných vplyvoch a potláčajú reakciu premeny protrombínu na trombín v krvi. Keď sa tieto protilátky zistia v krvi predĺžením koagulačných testov, sú definované ako "lupus antikoagulant".

Pozitívny výsledok:

nádory;

antinukleárny faktor

Antinukleárny faktor na bunkovej línii HEp-2 (ANF HEp-2, titre; ANA IF, titre). Pozitívny výsledok ANF sa pozoruje u viac ako 90 % pacientov so SLE a kožnými formami tohto ochorenia, sklerodermiou, zmiešaným ochorením spojivového tkaniva, Sjögrenovým syndrómom. Výsledkom stanovenia ANF je titer, čo je hodnota konečného zriedenia séra, ktoré si zachováva výraznú fluorescenciu jadra. Čím vyšší je menovateľ frakcie, tým väčšie je riedenie séra, tým viac protilátok v sére pacienta. Citlivosť tohto testu na SLE je 95 %.

Vysoké titre ANF (1/640 a vyššie):

vysoká pravdepodobnosť systémového reumatického ochorenia;
vysoké riziko autoimunitného ochorenia pečene;
zvýšenie titrov ANF v dynamike naznačuje exacerbáciu systémového ochorenia;
pri SLE titer koreluje so závažnosťou ochorenia a pri účinnej terapii klesá.

Nízke titre ANF (do 1/160):

u 1-2% zdravých jedincov;
u príbuzných pacientov so systémovými ochoreniami;
mnohé autoimunitné, infekčné a onkologické ochorenia.

Protilátky proti nukleozómom

Nukleozómové protilátky (NCA) patria medzi prvé, ktoré sa v tele tvoria počas vývoja SLE. Titre NCA korelujú s aktivitou ochorenia. Špecifickosť týchto autoprotilátok pre diagnózu SLE je viac ako 95 %.

Interpretácia výsledkov analýzy

Vysoký obsah protilátok proti nukleozómom (pozitívne):

liečivý lupus;
aktívny SLE, sprevádzaný nefritídou.

nízka pravdepodobnosť SLE;
nízke riziko poškodenia obličiek pri SLE.

Protilátky triedy IgG proti dvojvláknovej DNA

Prítomnosť IgG protilátok proti dvojvláknovej DNA (anti-dsDNA IgG; anti-dsDNA IgG) je vysoko špecifická pre SLE, v menšej miere pre iné difúzne ochorenia spojivového tkaniva alebo liekmi vyvolaný SLE. Senzitivita testu na SLE je 85 %. kvantifikácia anti-dsDNA IgG protilátky najvhodnejší na sledovanie stavu, prognózy a kontrolu terapie u pacientov so SLE, nakoľko koreluje s jeho aktivitou a závažnosťou glomerulonefritídy.

Dešifrovanie výsledku analýzy

Zvýšiť úroveň:

infekcia spôsobená vírusom Epstein-Barrovej;

O úroveň nižšie:

norma.

Protilátky proti kardiolipínu IgG

Antikardiolipínové IgG protilátky (aCL IgG) sú jedným z typov autoimunitných antifosfolipidových protilátok, ktoré sa podieľajú na patogenéze antifosfolipidového syndrómu. Ich prítomnosť v krvi sa prejavuje predĺžením fosfolipid-dependentných koagulogramových testov (protrombín, APTT), čo sa označuje ako „lupus antikoagulans“.

Interpretácia výsledkov analýzy

liečivý lupus;
hepatitída C;
borelióza;
HIV infekcia.

Protilátky proti kardiolipínu IgM

Protilátky proti kardiolipínu IgM (aCL IgM), keď sú zistené, indikujú vysoké riziko rozvoj SLE; aCL IgM sa detegujú u 20-50 % pacientov so systémovým lupus erythematosus a 3-20 % pacientov s inými systémovými reumatickými ochoreniami.

Výklad

Pozitívne (detegované protilátky):

hepatitída C;
borelióza;
infekcia HIV;
systémové ochorenia spojivového tkaniva.

Normy

Index	Norm
Lupus antikoagulant (LA)	negatívne
Antinukleárny faktor na bunkovej línii HEp-2 (ANF HEp-2, titre; ANA IF, titre)	< 1:160
Protilátky proti nukleozómom	< 20 отн. ед./мл
Protilátky triedy IgG proti dvojvláknovej DNA	< 20 МЕ/мл (отрицательно)
Protilátky proti kardiolipínu IgG (aCL IgG)	negatívne resp< 12 GPL-ед./мл
Protilátky proti kardiolipínu IgM (aCL IgM)	< 12 MPL-ед./мл

Antinukleárny faktor na bunkovej línii HEp-2 (ANF) je test na dôkaz antinukleárnych protilátok nepriamou imunofluorescenciou.

Pri systémovom lupus erythematosus (SLE) a iných systémových reumatických ochoreniach je imunitná odpoveď namierená proti nukleoproteínovým antigénom, t.j. komplexy nukleových kyselín a proteínov. Tieto endogénne nukleoproteínové komplexy sa tvoria počas procesu apoptózy epitelových buniek a pripomínajú cudzie vírusové častice. Urýchlenie procesov apoptózy pod vplyvom ultrafialového žiarenia, vírusové infekcie a lieky, spúšťa autoimunitné reakcie pri SLE. Počas apoptózy hlavné antigény protilátok kondenzujú v apoptotických telách, ktoré sa stávajú cieľom pre autoprotilátky. V súčasnosti je popísaných asi 200 druhov protilátok proti nukleoproteínom a ribonukleovým kyselinám, ktoré sa nazývajú antinukleárne protilátky. Pri autoimunitných ochoreniach nemajú autoprotilátky proti jadrovým antigénom priamy cytotoxický účinok na ľudské bunky, avšak imunitné komplexy sú schopné spustiť imunologický zápal, najmä v miestach, kde sú cievy obzvlášť tenké, vrátane obličiek, kože, centrálneho nervového systému , synoviálna membrána kĺbov, pleura.

Test antinukleárneho faktora (ANF) je hlavnou metódou detekcie antinukleárnych protilátok, ktorá umožňuje detekciu autoprotilátok proti nukleovým kyselinám (dsDNA, ssDNA, RNA), ribonukleoproteínov, ako aj väčšiny konformačných a nerozpustných antigénov.

Antinukleárne protilátky sa detegujú ich väzbou na intracelulárne antigény kontinuálnej ľudskej epiteliálnej bunkovej línie (HEp-2). Jadro a cytoplazma buniek HEp-2 obsahujú všetky charakteristické antigény Ľudské telo, čo umožňuje odhaliť všetky hlavné antinukleárne protilátky v jednom teste. Metódu nepriamej imunofluorescencie na bunkovej línii HEp2 odporúčajú ako zlatý štandard na detekciu antinukleárnych protilátok poprední európski (EASIgroup2010) a americkí odborníci (ACRANATaskforce2008). Kvôli rôznorodosti antinukleárnych protilátkových antigénov nie všetky z nich môžu byť purifikované alebo syntetizované na použitie v enzýmových imunoanalytických testoch na detekciu antinukleárnych protilátok.

ANF pozitivita na bunkovej línii HEp-2 sa pozoruje pri systémovom lupus erythematosus (SLE), systémových reumatických ochoreniach a mnohých autoimunitných ochoreniach, čo z neho robí univerzálny test pri vyšetrovaní pacientov s autoimunitnou patológiou. Pozitívny výsledok ANF sa pozoruje u viac ako 90% pacientov s difúznymi ochoreniami spojivového tkaniva, ako je systémový lupus erythematosus a kožné formy tohto ochorenia, sklerodermia a jej odrody, zmiešané ochorenie spojivového tkaniva, Sjögrenov syndróm. Detekcia ANF má veľký význam v diagnostike juvenilných jedincov reumatoidná artritída a autoimunitné ochorenia pečeň. Členovia tejto rodiny autoprotilátok možno nájsť v rôznych iných autoimunitných (tyreoiditída, diabetes), infekčných (vírusová hepatitída), zápalových a onkologické ochorenia. Incidencia ANF dosahuje klinicky 1–3 %. zdravých ľudí a mierne stúpa u osôb nad 65 rokov. Jedinci s vysokými titrami ANF majú zvýšené riziko vzniku autoimunitných ochorení.

Indikácie:

Systémový lupus erythematosus.
Subakútny kožný lupus a iné typy kožného lupusu.
Zmiešané ochorenie spojivového tkaniva.
Sjögrenov syndróm a pridružené ochorenia.
Difúzna a lokalizovaná sklerodermia, syndróm CREST.
Zápalové myopatie (polymyozitída a dermatomyozitída).
Juvenilná chronická artritída.
autoimunitná hepatitída.
Primárny biliárna cirhóza a sklerotizujúca cholangitída.
polyneuropatia a myelitída.

Školenie

Krv sa odporúča darovať ráno, medzi 8. a 12. hodinou. Krv sa odoberá nalačno alebo 4-6 hodín po posledný termín jedlo. Pitná voda bez plynu a cukru je povolená. V predvečer vyšetrenia sa treba vyhnúť preťaženiu jedlom.

Interpretácia výsledkov
Jednotky merania: titer.

Referenčné hodnoty:<1:160 (отрицательно).

Výsledkom stanovenia ANF je titer, čo je hodnota konečného zriedenia séra, pri ktorej je zachovaná významná fluorescencia jadra. Čím vyšší je menovateľ frakcie, tým väčšie je riedenie séra, tým viac protilátok v sére pacienta. Vysoké titre riedenia séra odrážajú vysokú afinitu a koncentráciu autoprotilátok.

Detekcia vysokých titrov (1/640 a viac) naznačuje vysokú pravdepodobnosť systémového reumatického ochorenia alebo autoimunitného ochorenia pečene a vyžaduje starostlivé klinické, laboratórne a inštrumentálne vyšetrenie. Absencia zvýšených titrov antinukleárneho faktora výrazne znižuje pravdepodobnosť systémových autoimunitných ochorení.

V nízkych titroch (do 1/160) možno antinukleárny faktor pozorovať u 1-2 % zdravých jedincov a príbuzných pacientov so systémovými ochoreniami. Frekvencia pozitívnych titrov v populácii mierne stúpa s vekom. Nízke titre antinukleárnych protilátok sa môžu vyskytnúť pri mnohých autoimunitných, infekčných a onkologických ochoreniach. Neprítomnosť vysokých titrov antinukleárnych protilátok výrazne znižuje pravdepodobnosť systémového reumatického procesu a môže sa použiť skôr na vylúčenie ako potvrdenie diagnózy.

Všeobecné informácie o štúdiu

Stanovenie antinukleárneho faktora (ANF) je „zlatým štandardom“ na detekciu antinukleárnych protilátok (ANA) a diagnostiku autoimunitných ochorení.

Patogenéza systémových ochorení spojivového tkaniva (CCTD) je úzko spojená s poruchami imunitného systému a zvýšenou tvorbou protilátok proti štruktúram vlastných buniek. Autoprotilátky proti zložkám bunkového jadra - antinukleárne protilátky - interagujú s nukleovými kyselinami a proteínmi jadra, cytoplazmatickými antigénmi, čo sa prejavuje zápalovými zmenami v tkanivách a orgánoch, bolesťami kĺbov a svalov, silnou únavou, chudnutím, pokožkou zmeny. ANA sa nachádzajú pri mnohých autoimunitných ochoreniach, ale najčastejšie sa vyskytujú pri systémovom lupus erythematosus (SLE). ANA sa vyskytuje u viac ako 90% pacientov so systémovými ochoreniami spojivového tkaniva, v súčasnosti je popísaných asi 200 odrôd, ktoré spája jediný názov - antinukleárny faktor.

Pri stanovení ANF nepriamou fluorescenciou sa častejšie využíva transplantovaná línia epitelových buniek ľudského laryngeálneho adenokarcinómu HEp-2. Bunky HEp-2 sú veľmi vhodným substrátom pre laboratórny výskum, pretože majú veľké jadrá a rastú v jednej vrstve na sklíčkach. ANA sa detegujú väzbou na intracelulárne antigény buniek HEp-2.

V štúdii sa epitelové bunky HEp-2 pestujú na okuliaroch, fixujú sa a inkubujú so zriedeným krvným sérom pacienta. Po odstránení prebytočného séra sa bunky inkubujú s fluoresceínom značenými protilátkami, potom sa znova premyjú a skúmajú sa pod fluorescenčným mikroskopom. V tomto prípade sa určuje titer protilátky a typ luminiscencie. Titer vyšší ako 1:160 sa považuje za diagnosticky významný. Počas exacerbácie reumatických ochorení presahuje 1:640 a počas obdobia remisie klesá na 1:160-1:320. Čím viac protilátok, tým vyšší titer. Podľa typu luminiscencie je možné stanoviť ciele pre antinukleárne protilátky, čo má veľký klinický význam a určuje taktiku ďalšieho vyšetrenia pacienta. Hlavné sú periférne, granulárne (malé/veľké), nukleárne, centromerické a cytoplazmatické typy farbenia jadier. Každý typ žiary má veľmi charakteristické vlastnosti, ktoré umožňujú rozlíšiť jeden variant od druhého.

Homogénne (difúzne) farbenie je spojené s prítomnosťou protilátok proti dvojvláknovej DNA, histónom a je charakteristické pre SLE a liekmi vyvolaný lupus.

Periférna luminiscencia je spôsobená periférnou distribúciou chromatínu v jadre, je spojená s protilátkami proti DNA a je špecifická pre SLE. Tento typ luminiscencie je dôležité odlíšiť od farbenia jadrovej membrány, ku ktorému dochádza pri autoimunitných ochoreniach pečene.

Granulárne (škvrnité, sieťované) sfarbenie je najbežnejšie a najmenej špecifické, zisťuje sa pri mnohých autoimunitných ochoreniach. Autoantigény sú v tomto prípade nukleoproteínové komplexy v jadre (antigény Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B a PCNA).

Veľmi vysoké titre ANF s veľkogranulárnym typom luminiscencie často naznačujú zmiešané ochorenie spojivového tkaniva.

Nukleárne (nukleárne) farbenie je spôsobené tvorbou protilátok proti zložkám jadierka (RNA polymeráza-1, NOR, U 3 RNP, PM / Scl), je detekované pri sklerodermii, Sjögrenovej chorobe. AHA sa niekedy zvyšuje pri endokrinných ochoreniach (diabetes mellitus 1. typu, tyreoiditída, tyreotoxikóza, polyendokrinný syndróm), kožných ochoreniach (psoriáza, pemfigus), počas tehotenstva, po transplantácii orgánov a tkanív, u pacientov na hemodialýze.

Centromerická luminiscencia sa objavuje v prítomnosti protilátok proti centromérom chromozómov a je charakteristická pre formu sklerodermie – syndróm CREST.

Cytoplazmatický typ luminiscencie je spojený s protilátkami proti tRNA syntetáze, najmä proti Jo-1, čo je typické pre dermatomyozitídu a polymyozitídu. Tento typ farbenia sa určuje aj v prítomnosti protilátok proti iným zložkám cytoplazmy pri autoimunitnej hepatitíde, primárnej biliárnej cirhóze.

Súčasná detekcia rôznych typov luminiscencie indikuje prítomnosť rôznych typov protilátok.

U zdravých jedincov možno jemnozrnnú fluorescenciu detegovať pri nízkych, stredných alebo vysokých titroch AHA, ale normálne by sa nemali detegovať hrubozrnné alebo homogénne typy fluorescencie.

V závislosti od výsledkov hodnotenia typu luminiscencie sa vyvíja ďalšia taktika liečby pacienta a predpisujú sa ďalšie štúdie na objasnenie spektra ANA.

Na čo slúži výskum?

Na diagnostiku systémových ochorení spojivového tkaniva.
Na diferenciálnu diagnostiku reumatických ochorení.
Vyhodnotiť účinnosť terapie autoimunitných ochorení.
Monitorovať priebeh systémových ochorení spojivového tkaniva.

Kedy je naplánované štúdium?

S príznakmi autoimunitného ochorenia (dlhotrvajúca horúčka, bolesti kĺbov, únava, strata hmotnosti, kožné zmeny).
Pri detekcii zmien charakteristických pre systémové ochorenia spojivového tkaniva (zvýšené ESR, hladiny C-reaktívneho proteínu, cirkulujúce imunitné komplexy).

Antinukleárne protilátky- všeobecný názov skupiny protilátok namierených proti rôznym zložkám bunky, ich výskyt je spojený najmä s autoimunitnými ochoreniami.

Synonymá: antinukleárne protilátky, antinukleárny faktor, antinukleárny faktor, protilátky proti extrahovateľným jadrovým (jadrovým) antigénom, antinukleárne protilátky, Hep-2 substrát, ANA-Hep2, fluorescenčná detekcia antinukleárnych protilátok, ANA, FANA

Antinukleárne protilátky sú

komplex protilátok (viac ako 200), najmä imunoglobulínov G (menej často IgM a IgA), sa objavuje v dôsledku porušenia mechanizmu autotolerancie pri autoimunitných a reumatických ochoreniach.

V niektorých prípadoch nie je imunitná odpoveď namierená proti cudzím ľuďom, ale proti vlastným tkanivám. V tomto prípade sa hovorí o autoimunitné ochorenie. A protilátky, ktoré sa vytvárajú proti vlastným bunkám alebo ich zložkám, sa nazývajú autoimunitné.

Väčšina ľudí má v krvi malé (!) množstvo autoprotilátok, ktoré nie sú prejavom ochorenia.

Iba v prípade vážneho zlyhania imunitného systému sa hladina autoprotilátok zvýši a postačuje na stanovenie diagnózy.

ANA môže byť pozitívna ešte skôr, ako sa objavia prvé príznaky ochorenia. Asi 95 % pacientov so systémovým lupus erythematosus má v krvi antinukleárne protilátky. Prítomnosť príznakov lupusu potvrdzuje diagnózu.

Mechanizmus vzdelávania

vystavenie ultrafialovým lúčom na koži vedie k aktivácii programovanej bunkovej smrti (apoptózy), čo je normálna reakcia organizmu, no pri systémových ochoreniach súčasne hromadne migrujú
predtým nedostupné a pre imunitný systém neviditeľné zložky bunky, ako sú jadierka, históny, obal jadra atď., sú „holé“ a makrofágy namiesto toho, aby jednoducho „využívali“ tento materiál, vysielajú o ňom signál. pozdĺž reťazca imunitnej odpovede
B-lymfocyty ako odpoveď na signál z makrofágu začnú produkovať antinukleárne protilátky, ktoré naviazaním na príslušný antigén vytvárajú imunitné komplexy (jadrový antigén + protilátka IgG, IgM, IgA)
imunitné komplexy sa usadzujú na bazálnej membráne rôznych orgánov a tkanív, najmä ciev, aktivujú komplementový systém – lokálna zápalová odpoveď
v dôsledku toho - poškodenie a dysfunkcia orgánu

Antinukleárne protilátky sú namierené proti rôznym štruktúram normálnej bunky.

Typy antinukleárnych protilátok:

anti-Ro (SS-A) – protilátky proti proteínom spojeným s Y1-Y5 RNA v spliceozómoch
anti-Jo1 - protilátky proti cytoplazmatickému antigénu Jo-1
anti-Sm
anti-La (SS-B) - protilátky proti proteínu spojenému s RNA polymerázou-3
anti-Sci 70 — protilátky proti jadrovej topoizomeráze
anti-U1 RNP - protilátky proti ribonukleoproteínu U1
anticentromérne protilátky
antihistónové protilátky

Indikácie

diagnostika systémového lupus erythematosus, Schergenov syndróm

Systémový lupus erythematosus

Systémový lupus erythematosus- autoimunitné ochorenie spojivového tkaniva a krvných ciev. Toto je najťažšie ochorenie spojivového tkaniva, pri ktorom dochádza k ostrým bolestiam kĺbov, poškodeniu kože ("motýľ"), seróznych membrán, srdca, obličiek, nervového systému, pľúc, trofických porúch.

Symptómy

artritída - zápal kĺbu, prejavujúci sa bolesťou, opuchom, zhoršenou pohyblivosťou, začervenaním kože a horúčkou nad ňou
zápal vonkajšej výstelky srdca alebo pleury (alebo) neznámeho pôvodu
zmeny vo výsledkoch (- bielkoviny alebo červené krvinky v moči)
- Level Up Destruction
trombocytopénia je pokles v
- znížený počet
kožné prejavy – vyrážka, zhrubnutie kože, najmä po aktív
Raynaudov syndróm - periodické sfarbenie prstov na nohách a rukách (modré a začervenané) so zhoršenou citlivosťou a bolesťou
atypické neurologické a psychiatrické symptómy
horúčka, únava, strata hmotnosti,

Metódy

Existujú dva spôsoby stanovenia antinukleárnych protilátok v krvi.

Nepriama imunofluorescenčná mikroskopia(FANA - fluorescenčný test antinukleárnych protilátok) na preparáte Hep-2 buniek (bunková línia odvodená z adenokarcinómu hrtana) - antinukleárne protilátky (ak existujú) sa viažu na antigény buniek Hep-2, pridávajú špeciálne svietiace značky, ktoré sa pripájajú vytvorený komplex a pod mikroskopom sa pozerá na intenzitu a typ luminiscencie. Najlepšia metóda na štúdium antinukleárnych protilátok. Iné meno - .

Výsledok štúdie je zapísaný vo forme titra - maximálne zriedenie krvi, pri ktorom je viditeľná luminiscencia, je opísaný aj typ fluorescencie (v prípade pozitívneho výsledku). Čím viac protilátok, tým vyšší titer. Nízke titre sa považujú za negatívne, zatiaľ čo vysoké titre naznačujú zvýšenú koncentráciu antinukleárnych protilátok.

Typy fluorescencie pri hodnotení ANA:

homogénne (difúzne, homogénne) - so systémovým lupus erythematosus, zmiešané ochorenia spojivového tkaniva (MCTD)

granulárne (granulárne) - so systémovým lupus erythematosus, Sjögrenovým syndrómom, sklerodermiou, reumatoidnou artritídou a MCTD - najviac nešpecifické

nukleárne (nukleárne) - so sklerodermiou a polymyozitídou

centromerické - so sklerodermiou a syndrómom CREST

cytoplazmatická - dermatomyozitída, polymyozitída, autoimunitné ochorenia pečene, primárna biliárna cirhóza

Príklad pozitívneho výsledku testu na antinukleárne protilátky: „ Pozitívne riedenie/titer 1:320, homogénny vzor“.

Algoritmus činnosti lekára po štúdiu antinukleárnych protilátok metódou FANA

negatívny výsledok testu na antinukleárne protilátky + príznaky - urobte testy: anti-Ro a anti-Jo1
pozitívny výsledok testu na antinukleárne protilátky + prítomnosť/neprítomnosť symptómov - test na anti-DNA, anti-Sm, anti-Ro, antihistónové a anticentromérové protilátky, anti-Sci-70, anti-U1 RNP, anti-Jo1 - závisí od prejavov choroby

Enzýmová imunoanalýza

Enzýmová imunoanalýza (ELISA)) - protilátky prítomné v krvi sa viažu na zodpovedajúci antigén, čo vedie k zmene farby roztoku.

menej ako 1,0 U - negatívny výsledok (normálne)
1,1-2,9 U - slabo pozitívny (vyžaduje opakovanie)
3,0-5,9 U - pozitívne
viac ako 6,0 - výrazne pozitívne

Pozitívny výsledok testu na antinukleárne protilátky- to nie je diagnóza, ale výkričník o potrebe ďalšieho výskumu. Vyžaduje pravidelné, dôkladnejšie vyšetrenie na čo najskoršie odhalenie možnej choroby.

Negatívny výsledok testu na antinukleárne protilátky naznačuje ich neprítomnosť v krvi, ale nevylučuje diagnózu autoimunitného ochorenia.